MDCK-II細胞/ MDCK-II犬腎細胞     培養(yǎng)步驟

產(chǎn)品名稱：MDCK-II細胞

中文名稱：犬腎細胞；MDCK-II

規(guī)格：T25

形態(tài)特征：L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎發(fā)過程中的許多模式形成和生長事件。這些細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它們是目前生產(chǎn)Wnt-3A條件培養(yǎng)基的好來源。由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實驗有必要用其來源細胞株(ATCC CRL-2648)作對照。

生長狀態(tài)：上皮樣

特征特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清貨號：HN-FBS-500）

傳代方法：1:3傳代，3-4天傳1次

凍存條件：HAKATA ® 無血清細胞凍存液 貨號：H-W-100 規(guī)格：100ML

支原體檢測：陰性

使用權(quán)限：A類

參考文獻：

供應(yīng)商：上海慧穎生物科技有限公司

復(fù)蘇周期：10個工作日左右

培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

慧穎生物是一家專業(yè)從事細胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品的公司，擁有獨立細胞房（可隨時約定參觀），供應(yīng)胎牛血清，無血清細胞凍存液，無血清培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)基，胰酶，雙抗，*培養(yǎng)基，STR鑒定細胞，感受態(tài)細胞等，專業(yè)，專注，性價比高，是您Shou選之家。

熱賣細胞：

貨號    簡稱    中文名稱    培養(yǎng)條件    特性    形態(tài)

H001    HeLa    人宮頸癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H002    143B    人骨肉瘤細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H003    293T    人胚腎細胞 DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H004    A2780   人卵巢癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H005    A549    人非小細胞肺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H006    A673    人尤因肉瘤細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    多邊形

H007    AGS 人胃腺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H008    BGC823  人胃腺癌細胞(低分化)    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H009    C33A    人宮頸癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H010    CACO2   人結(jié)直腸腺癌細胞    DMEM+20% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H011    COLO205 人結(jié)腸癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   半懸浮  上皮細胞樣

H012    DU145   人前列腺癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H013    ES-2    人卵巢透明細胞癌細胞    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H014    H1650   人非小細胞肺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H015    H460    人大細胞肺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H016    HACAT   人永生化角質(zhì)形成細胞    DMEM+15% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H017    HCT116  人結(jié)腸癌細胞    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H018    HEK293  人胚腎細胞 DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H019    HEPG2   人肝癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H020    HGC27   人胃癌細胞(未分化)  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H021    HT-29  人結(jié)腸癌細胞    McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H022    HUVEC   人臍靜脈內(nèi)皮細胞    ECM 貼壁    上皮細胞樣

H023    KYSE150 人食道癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H024    L02(HL7702)(QSG-7701)   人正常肝細胞    RPMI-1640+20% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H025    LOVO    人結(jié)腸癌細胞    F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H026    MCF-10A 人正常乳腺上皮細胞  DMEM/F12(1:1) 培養(yǎng)基+胰島素(10ug/ml)+表皮生長因子(20ng/ml)+100ng/ml霍亂病毒 +5% 馬血清   貼壁    上皮細胞樣

H027    MCF7   人乳腺癌細胞    DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素    貼壁    上皮細胞樣

H028    LX-2    人肝星狀細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H029    MDA-MB-468  人乳腺癌細胞    L-15+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H030    MIA Paca2   人胰腺癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣 少量圓形懸浮

H031    NCI-H1299   人非小細胞肺癌細胞 RPMI1640+10%FBS 貼壁    上皮細胞樣

H032    PANC-1  人胰腺癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H033    RBE 人肝膽管癌細胞 DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細胞樣

H034    SAOS-2  人成骨肉瘤細胞 McCoy's 5A+15%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H035    SiHa    人子宮頸鱗癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H036    NB 4    急性早幼粒細胞白血病細胞    RPMI-1640+10% FBS   懸浮    圓形

H037    SPC-A-1 人肺腺癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H038    SW480   人結(jié)腸癌細胞    L-15+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H039    U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H040    ZR-75-1 人乳腺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H041    SW1116  人結(jié)腸腺癌細胞  L-15+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H042    293A    人胚腎細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H043    SGC-7901    人胃腺癌細胞    RPMI-1640 +10% FBS  貼壁    上皮細胞樣

H044    Ishikawa    人子宮內(nèi)膜癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H045    Eca-109 人食管癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H046    RD-ES   人尤文氏肉瘤    RPMI-1640+15% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H047    NCI-H1437   人肺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H048    HOS     人骨肉瘤細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H049    Hela S3 人宮頸癌細胞    F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H050    ECC1    人宮頸內(nèi)膜腺癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H051    SUP-B15     人Ph+急淋白血病細胞系   IMDM+20% FBS    懸浮    淋巴母細胞樣

H052    TF-1    人血液白血病細胞    RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF   懸浮    淋巴母細胞樣

H053    NCI-H446    人小細胞肺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H054    GES-1   人胃正常黏膜上皮細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H055    IOSE80 人卵巢正常上皮細胞株    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H056    GIST882 人胃腸道間質(zhì)瘤細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H057    KGN 人卵巢顆粒細胞癌    DMEM/F12(1:1)+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H058    U937    人組織細胞淋巴瘤細胞    RPMI-1640 +10% FBS  懸浮    單核細胞樣

H059    SV-HUC-1    人膀胱上皮永生化細胞    F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H060    tpc-1   人乳頭瘤狀甲狀腺癌細胞  F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H061    hela-luci   Luciferase穩(wěn)定表達Hela細胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H062    colo320 人結(jié)腸癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   半懸浮  圓形

H063    bxpc-3  人胰腺腺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H064    raji    人Burkitt's淋巴瘤細胞  RPMI-1640+10% FBS   懸浮    淋巴母細胞樣

H065    5637    人膀胱癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H066    chang-liver 人肝細胞(已被hela污染）    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H067    a549-gfp    gfp標記的A549細胞  F12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H068    hs578.t 人乳腺癌細胞    DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素    貼壁    上皮細胞樣

H069    T24 人膀胱移行細胞癌細胞    McCoy's 5A+15%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H070    K562    人慢性髓系白血病細胞    IMDM+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞樣

H071    EH-GB1  人膽囊癌細胞（表達GFP和RED2）  DMEM+15% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H072    skov-3  人卵巢腺癌細胞  McCoy's 5A+15%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H073    ECV304  人膀胱癌細胞（T24衍生物）   M199+20%FBS 貼壁    上皮細胞樣

H074    nci-n87 人胃癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H075    B-CPAP  人甲狀腺癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H076    NCI-H1975   人非小細胞肺腺癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H077    HK-2    人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞    DMEM/F12(1:1)+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H078    J82 人膀胱癌細胞    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H079    A431    人皮膚鱗癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H080    MG63    人骨肉瘤細胞    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H081    SW48    人結(jié)腸癌細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H082    ME180   人宮頸表皮樣癌  McCoy's 5A+10%FBS   貼壁    上皮細胞樣

H083    hepaRG-GFP  Gfp標記的人肝癌細胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H084    BEAS-2B 人正常肺上皮細胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H085    THP-1  ATCC：TIB-202    人髓系白血病單核細胞    RPMI-1640+10% FBS   懸浮    單核細胞樣

H086    PC9 人肺癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H087    Fadu    人咽鱗癌細胞    DMEM(L)+10% FBS 貼壁    上皮細胞樣

H088    Huh7    人肝癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H089    Hcc9810 人肝癌細胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H090    Jurkat cloneE6-1    人急性T淋巴細胞白血病細胞  RPMI-1640+10% FBS   懸浮    淋巴母細胞樣

H091    KBM-7   人慢性粒細胞白血病細胞  IMDM+10% FBS    懸浮    圓形

H092    GBC-SD  人膽囊癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H093    JEKO-1  人套細胞淋巴癌細胞  RPMI-1640+20% FBS   懸浮    圓形

H094    CAL27   人口腔鱗癌  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣

H095    DB  彌漫大B細胞淋巴瘤細胞  RPMI-1640+10% FBS   懸浮    淋巴母細胞樣

H096    hne1-lmp1   轉(zhuǎn)入LMP1基因人鼻咽癌細胞   RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H097    nci-h226    人肺鱗癌細胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細胞樣

H098    hepg2.2.15  人肝癌細胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣